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大鼠大豆苷元(Daidzein)ELISA檢測試劑盒說明書
BS-8567大鼠大豆苷元(Daidzein)ELISA試劑盒
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用競爭性酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，專用于定量檢測大鼠血漿、血清或組織勻漿等生物樣本中的大豆苷元(Daidzein)含量。大豆苷元是一種天然異黃酮類化合物，具有抗氧化、抗炎及調(diào)節(jié)免疫等生物活性，廣泛存在于豆科植物中，其含量檢測對藥理學(xué)研究和營養(yǎng)評估至關(guān)重要。本試劑盒基于抗原-抗體特異性結(jié)合原理，通過酶標信號放大實現(xiàn)高靈敏度檢測，適用于實驗室常規(guī)分析。
試劑盒組成
預(yù)包被微孔板：96孔(12條×8孔)，板條可拆卸，包被有大豆苷元特異性抗體。
標準品：6個濃度梯度(0.13–61.02 ng/mL)，凍干粉狀，臨用前用標準品稀釋液復(fù)溶。
酶標記物：辣根過氧化物酶(HRP)標記的競爭抗原，棕色避光保存。
顯色底物：TMB(四甲基聯(lián)苯胺)溶液，無色透明液體。
終止液：2M硫酸溶液，用于終止反應(yīng)。
洗滌液：20×濃縮緩沖液，需用去離子水稀釋后使用。
樣本稀釋液：用于調(diào)節(jié)樣本濃度至檢測范圍。
封板膜：2張，用于微孔板密封。
說明書：1份。
儲存條件
未開封試劑盒：2–8°C避光保存，有效期12個月。
開封后：標準品、酶標記物及顯色底物需分裝凍存(-20°C)，避免反復(fù)凍融;微孔板干燥密封保存。
禁止凍結(jié)濃縮洗滌液，防止結(jié)晶析出。
樣本處理
血漿/血清樣本：采集后立即離心(3000 rpm，10分鐘)，取上清液，-80°C保存。避免溶血。
組織勻漿：稱取組織，加入生理鹽水(1:9 w/v)勻漿，離心取上清液。
注意事項：樣本中大豆苷元可能以結(jié)合態(tài)存在，建議使用β-葡萄糖醛酸酶水解以提高檢測靈敏度。樣本渾濁時需離心(5000 rpm，10分鐘)或過濾(0.22 μm膜)。
實驗步驟
1. 試劑準備
洗滌液：用去離子水將20×濃縮液稀釋至1×(如10 mL濃縮液+190 mL水)。
標準品梯度：用標準品稀釋液將凍干標準品復(fù)溶，梯度稀釋至0.13、0.39、1.17、3.51、10.53、61.02 ng/mL。
樣本稀釋：用樣本稀釋液將待測樣本稀釋至檢測范圍內(nèi)(建議預(yù)實驗確定稀釋倍數(shù))。
2. 加樣與孵育
每孔加入100 μL標準品或樣本(設(shè)空白孔僅加樣本稀釋液)。
每孔加入50 μL酶標記物，輕搖混勻。
37°C避光孵育60分鐘。
3. 洗滌
棄去孔內(nèi)液體，每孔加入350 μL洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次，拍干。
4. 顯色與終止
每孔加入100 μL顯色底物，37°C避光孵育15分鐘。
每孔加入100 μL終止液，輕搖混勻。
5. 測定
立即用酶標儀在450 nm波長下測定吸光度(OD值)，參考波長630 nm。
結(jié)果計算
標準曲線繪制：以標準品濃度(ng/mL)為橫坐標，OD值為縱坐標，擬合四參數(shù)邏輯曲線(推薦使用專業(yè)軟件)。
樣本濃度計算：根據(jù)樣本OD值代入標準曲線方程，乘以稀釋倍數(shù)得到實際濃度。
性能參數(shù)
靈敏度：檢測限0.13 ng/mL。
精密度：板內(nèi)變異系數(shù)(CV)<10%，板間CV<15%。
回收率：80–120%(驗證方法：加標回收實驗)。
線性范圍：0.13–61.02 ng/mL，相關(guān)系數(shù)r2≥0.98。
特異性：與類似結(jié)構(gòu)化合物(如染料木素)交叉反應(yīng)率<5%。
注意事項
操作規(guī)范：避免酶標記物和顯色底物接觸金屬離子;顯色后30分鐘內(nèi)測定，防止信號衰減。
質(zhì)量控制：每批次實驗需包含標準曲線和質(zhì)控樣本(推薦高、中、低濃度)。
安全防護：終止液含強酸，需佩戴手套和護目鏡操作。
廢物處理：含酶廢物需經(jīng)滅活處理后再丟棄。
常見問題解答
信號偏低：檢查孵育時間或溫度是否不足;確認洗滌步驟是否充分。
高背景值：可能因洗滌不凈或樣本基質(zhì)干擾，建議增加洗滌次數(shù)或優(yōu)化樣本前處理。
標準曲線異常：復(fù)溶標準品時需充分混勻，避免氣泡影響濃度準確性。
注：本產(chǎn)品僅供科研使用，不作為實驗依據(jù)。具體操作請以實際試劑盒說明書為準。
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